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懸浮細胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)簡介

懸浮細胞的電融合轉(zhuǎn)染技術(shù)融合懸浮細胞的步驟與電穿孔的很類似，只是在進行高強度的電場脈沖前后，必須用低幅、高頻電場使細胞排成一條鏈。1用融合介質(zhì)（FM）洗懸浮細胞兩次，然后懸于FM中。洗滌細胞時，在臺式離心機上1000rpm下離心3分鐘，得到細胞沉淀，棄去上清液將細胞懸于新鮮FM介質(zhì)中。2將懸浮細胞轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的融合室內(nèi)。假如要使兩種不同的細胞彼此融合，轉(zhuǎn)移前要充分混合。3啟動介電電泳場，其振幅通常小于200V/cm，頻率在2MHz以內(nèi)，用顯微鏡檢測細胞是否排成一條鏈，調(diào)節(jié)振幅和...

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發(fā)酵罐中微生物生長特性及其在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用

微生物是發(fā)酵工業(yè)的靈魂，對微生物控制的發(fā)酵過程進行優(yōu)化，我們要了解發(fā)酵罐中微生物的生長反應(yīng)特性。微生物細胞生長是細胞個體內(nèi)許多化學(xué)反應(yīng)的綜合結(jié)果。這些反應(yīng)包括合成提供其它反應(yīng)需要的吉布斯自由能；利用底物合成結(jié)構(gòu)單元，再聚合成大分子物質(zhì)，供合成細胞所需等。正常情況下，微生物細胞為了確保有序和高效生長，必須將這些反應(yīng)有機地結(jié)合在一起，經(jīng)濟地分配胞內(nèi)各代謝途徑的通量。大腸桿菌是發(fā)酵研究中用得最多的微生物。在大腸桿菌生長過程中前人已觀察到下列現(xiàn)象∶(1)在大腸桿菌快速生長期間，生物合...

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懸浮細胞電穿孔轉(zhuǎn)染法的實驗流程詳解

[實驗原理]當(dāng)細胞置于非常高的電場中，細胞膜就變得具有通透性，能讓外界的分子擴散進細胞內(nèi)，這一現(xiàn)象稱為電穿孔。運用這一技術(shù)，許多物質(zhì)，包括DNA、RNA、蛋白質(zhì)、藥物、抗體和熒光探針都能載入細胞。作為一種基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法，電穿孔已被廣泛用于各種細胞類型，包括細菌、酵母、植物和動物細胞；而且，它還能作為注射方法（稱為電注射），把各種外源物質(zhì)引入活細胞。與其他常用的導(dǎo)入外源物質(zhì)的方法相比，電穿孔具有很多優(yōu)點。一.不必象顯微鏡那樣使用玻璃針，不需要技術(shù)培訓(xùn)和昂貴的設(shè)備，可以一次對成百萬...

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內(nèi)毒素去除方法有哪些

內(nèi)毒素去除方法概述內(nèi)毒素是存在于革蘭氏陰性細菌外膜中的致病因子，具有較好的耐熱性和穩(wěn)定性，對人體健康有著不可忽視的危害。本文將概述內(nèi)毒素的成分和特性，并討論了目前常見的內(nèi)毒素去除方法包括超濾去除法、活性炭法、表面活性劑萃取、強酸強堿、層析法等。同時還分析了各種方法的優(yōu)缺點以及在工業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用前景。一、超濾去除法和活性炭法內(nèi)毒素由多糖O抗原、核心多糖和類脂A等組成，作為細菌外膜的主要結(jié)構(gòu)成分，不易被化學(xué)藥品破壞。為了有效去除內(nèi)毒素，可以采用多種方法。超濾去除法通過使用孔徑適當(dāng)...

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細胞轉(zhuǎn)染方法之-磷酸鈣沉淀法

【實驗原理】磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣-DNA復(fù)合物的一種將DNA導(dǎo)入真核細胞的轉(zhuǎn)染方法。磷酸鈣有利于促進外源DNA與靶細胞表面的結(jié)合。磷酸鈣-DNA復(fù)合物粘附到細胞膜并通過胞飲作用進入靶細胞，被轉(zhuǎn)染的DNA可以在細胞內(nèi)進行瞬時表達，也可整合到靶細胞的染色體上從而產(chǎn)生不同基因型和表型的穩(wěn)定克隆。該方法可廣泛用于轉(zhuǎn)染許多不同類型的細胞。細胞轉(zhuǎn)染試劑【儀器、材料和試劑】（一）儀器、用具CO2培養(yǎng)箱[1]、10cm細胞培養(yǎng)平板、巴斯德吸管、微量移液器[2]、15ml錐形管、燒杯、量筒...

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