直接影響到pcr檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素,通常有以下幾種:
引物與模板DNA互補(bǔ)的程度、 酶的濃度、鎂離子濃度、dNTP的質(zhì)量與濃度。
還有循環(huán)次數(shù)、溫度和時(shí)間的設(shè)置,pcr實(shí)驗(yàn)設(shè)備與配套耗材等
在眾多影響因素中,pcr實(shí)驗(yàn)耗材也是影響pcr檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重要因素。
用于pcr檢測的耗材類型包括:8連管、pcr管、無裙邊、半裙邊,全裙邊,深孔板孔等。這么多的耗材該如何選擇呢?
pcr耗材多數(shù)屬于PP材質(zhì),由于這種材質(zhì)不僅有良好的化學(xué)耐性而且表面不易粘附生物分子,可耐120°C的高溫。我們常見的pcr耗材規(guī)格及體積如下:
單管/聯(lián)管:0.5mL,0.2mL, 0.15mL 96孔板:0.2mL, 0.15mL
384孔板:0.04mL 。
當(dāng)樣品量比較少的時(shí)候,可選用單管或8排管。
Pcr管多數(shù)是透明的,但Qpcr實(shí)驗(yàn)中建議選用白色pcr耗材,這種材質(zhì)的耗材可良好地反射熒光信號(hào),優(yōu)化實(shí)時(shí)熒光定量pcr檢測的結(jié)果。
在pcr板中無裙邊板適用于大多數(shù)的PCR實(shí)驗(yàn),但其移液過程中穩(wěn)定性較差不太適用于自動(dòng)化的PCR儀。
半裙邊板的移液穩(wěn)定性相對(duì)較高比較適合自動(dòng)化的應(yīng)用。
全裙邊板的移液穩(wěn)定性好,機(jī)械強(qiáng)度較好,比較適用于凸模pcr儀和自動(dòng)PCR系統(tǒng)。
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